Twist 人甲基化组检测组合

Twist 人甲基化组通过 123 Mb 的基因组区域涵盖了 398 万个 CpG 位点，聚焦生物相关的甲基化标志物。该组合具有高度的靶向性，可捕获和检测基因组中最新、已注释的和相关的 CpG 甲基化区域。采用该组合进行富集后可检测基因组上 84% (17,915,988) 的 CpG 岛。同时，还额外覆盖了 105,288,339 个碱基，包含了后续的 CpG shore、CpG shelf、CpG open sea 及其他碱基对。覆盖度由内部试验数据确定，其中包括与阵列覆盖度数据文件相比的阴影覆盖度。

微阵列设计具有静态内容，可能会阻碍发现感兴趣的新表观遗传靶标。目前市场上的阵列也限制了表观基因组中的甲基化组覆盖度，很大比例的甲基化 CpG 位点未得到测量。Twist 人甲基化组靶向富集方法通过杂交捕获组合解决了上述限制问题，该组合能够在 NGS 平台提供的整个测序片段中扩展内容，提高单碱基分辨率。

微阵列在甲基化检测的极端处存在固有的局限性，这归因于低端处的背景噪声高、高端处的信号饱和。由于 NGS 动态范围更大，Twist 人甲基化组检测组合对甲基化区域 (DMR) 差异识别更准确，尤其是在甲基化部分的低端处和高端处。 

Twist 人甲基化组检测组合经过设计和湿实验室优化，可提供准确、灵敏且高性能的杂交捕获效率。该组合在 30 倍覆盖度下实现了 90% 碱基的覆盖度深度，中靶率为 95%，探针特异性高。另外，还实现了 1.54 的 80 倍富集，通过缩小碱基检出堆积的峰值和谷值之间的增量，保证整个靶向区域的高度均匀性。文库复杂性在 150 倍原始覆盖度的高测序深度下，以 < 4% 的重复率成反比表示。整体组合捕获效率指标显示，整个甲基化部分检测的水平置信度高，测序成本最低。