文库制备酶切片段化试剂盒 2.0

Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 的中靶率与 Twist 文库制备 EF 试剂盒 1.0 的中靶率相当。这里比较了不同杂交条件下的中靶片段比例。 

靶向富集使用 Twist 核心外显子组组合和 Twist 通用接头系统进行。测序使用 NextSeq® 550 或 2000 平台完成。将数据降至 150x 的靶向覆盖深度，并使用 Picard Metrics 进行分析。误差线表示重复样本间的标准差。

在文库制备过程中，尽可能减少不合适的 DNA 连接或重组可以将嵌合体导致的测序错误降至最低。如图所示，与 Twist 文库制备 EF 试剂盒 1.0 相比，升级版 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 可显著降低嵌合测序片段比例。且其文库制备的嵌合率与机械片段化相近。

NGS 文库通过 Twist 酶切片段化文库制备试剂盒 1.0、Twist 酶切片段化文库制备试剂盒 2.0 或 Twist 机械片段化文库制备试剂盒生成。靶向富集使用 Twist 核心外显子组组合和 Twist 通用接头系统进行。使用 NextSeq® 2000 平台完成测序。将数据降至 150x 的靶向覆盖深度，并展示 Picard Metrics PCT_CHIMERAS 数据。误差线表示重复样本间的标准差。

可重复的性能确保了结果的可靠性。当实验条件保持不变时，Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 可产生稳定、一致的 DNA 文库片段大小。如图所示为使用此试剂盒生成的 8 个不同 NGS 文库的电泳图。荧光曲线的重叠显示文库制备具有一致性，可以在运行之间实现。 

NGS 文库使用 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 和 Twist 通用接头系统制备而成。在 37°C 下，对 50 ng 高质量 gDNA 进行片段化处理，持续 20 分钟，再进行 6 个PCR循环扩增。使用 Agilent DNA 7500 检测方法分析样本，使用 Expert 2100 软件分析结果。

使用 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0，仅需调整片段化时间，即可根据您的具体需求调节 DNA 文库片段大小。如图所示是采用不同的片段化时间获得的 4 个 NGS 文库的电泳图。

NGS 文库使用 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 和 Twist 通用接头系统制备而成。在 37°C 下，按照不同的时长对 50 ng 高质量 gDNA 进行片段化处理，再进行 6 个 PCR 循环扩增。使用 Agilent DNA 7500 检测方法分析样本，使用 Expert 2100 软件分析结果。

扩增期间产生错误不可避免，但错误并非时常出现。升级版 Twist 文库制备 EF 试剂盒 2.0 包含 Equinox 反应预混液，其中含有高保真的热启动酶。与之前推荐和常用的聚合酶相比，Equinox 反应预混液的错误率更低，错误插入的碱基更少。这意味着它能实现更精准的扩增，从而获得值得信赖的测序数据。

采用专有的 NGS 分析方法来检测大量错配碱基对中的碱基错配事件。给出的数值代表所有错配事件的平均错误率。