请考虑引物设计的标准规则：

1. 20-25 bp 的长度
2. G/C 内容的 35-70%
3. 熔化温度（Tm）为 55-60°C
4. 引物对的 Tm 值应相差 5°C 以内
5. 引物对不应有互补区
6. 避免可变区中的内部引物结合位点