Kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática 2.0

La tasa en el objetivo del kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 es equivalente a la tasa en el objetivo alcanzada con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 1.0. Aquí se muestra una comparación de la fracción de activaciones en el objetivo en distintas condiciones de hibridación. 

El enriquecimiento del objetivo se realizó con el panel de exoma nuclear Twist y el sistema de adaptador universal Twist. La secuenciación se realizó en plataformas NextSeq® 550 o 2000. Se submuestrearon los datos a 150x el tamaño del objetivo y se analizaron mediante las métricas de Picard. Las barras de error representan la desviación estándar entre réplicas.

Durante la preparación de bibliotecas, la minimización de uniones o recombinaciones inadecuadas de ADN minimiza los errores de secuenciación derivados de quimeras. El kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 proporciona una fracción significativamente reducida de lecturas de quimeras, como se muestra aquí en comparación con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 1.0. También muestra tasas de quimeras equivalentes a la preparación de bibliotecas con fragmentación mecánica.

Las bibliotecas de NGS se generaron con el kit de preparación de bibliotecas con fragmentación enzimática Twist 1.0, el kit de preparación de bibliotecas con fragmentación enzimática Twist 2.0 o el kit de preparación de bibliotecas Twist con fragmentación mecánica. El enriquecimiento del objetivo se realizó con el panel de exoma nuclear Twist y el sistema de adaptador universal Twist. La secuenciación se realizó en una plataforma NextSeq® 2000. Se submuestrearon los datos a 150x el tamaño del objetivo y se comunicó la métrica Picard PCT_CHIMERAS. Las barras de error representan la desviación estándar entre réplicas.

El rendimiento repetible garantiza la confianza en los resultados. Cuando las condiciones del experimento se mantienen constantes, el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 proporciona un tamaño de fragmento de biblioteca de ADN sólido y coherente. Aquí se muestran 8 electroferogramas diferentes de bibliotecas de secuenciación de última generación (NGS) generadas con el kit. La superposición de las curvas fluorescente demuestra la coherencia en la preparación de bibliotecas que puede alcanzarse de un ciclo a otro. 

Las bibliotecas de NGS se generaron con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 y el sistema de adaptador universal Twist. Se fragmentaron 50 ng de ADNg de alta calidad durante 20 minutos a 37 °C. Se utilizaron 6 ciclos de PCR para la amplificación. Las muestras se analizaron con el análisis Agilent DNA 7500 y los resultados se superpusieron en el software Expert 2100.

Con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0, el tamaño de los fragmentos de la biblioteca de ADN puede adaptarse a sus necesidades específicas con tan solo ajustar el tiempo de fragmentación. Aquí se muestran los cuatro electroferogramas de las bibliotecas de NGS generadas con distintos tiempos de fragmentación.

Las bibliotecas de NGS se generaron con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 y el sistema de adaptador universal Twist. Se fragmentaron 50 ng de ADNg de alta calidad durante distintos tiempos a 37 °C. Se utilizaron 6 ciclos de PCR para la amplificación. Las muestras se analizaron con el análisis Agilent DNA 7500 y los resultados se superpusieron en el software Expert 2100.

Los errores durante la amplificación son inevitables, pero no tienen que ser comunes. El kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 incluye la mezcla maestra Equinox, que incluye una enzima de arranque caliente de alta fidelidad. En comparación con la polimerasa previamente recomendada y de uso común, la mezcla maestra Equinox demuestra una tasa de error menor con menos bases mal incorporadas. Esto supone una amplificación más precisa y, en última instancia, datos de secuenciación fiables.

Los casos de bases mal incorporadas en numerosas parejas de bases mal emparejadas se midieron con un análisis patentado basado en la NGS. Los valores presentados representan una tasa de error media de todos los casos de incorporaciones incorrectas.