对定制载体有什么要求?

确保您的载体满足以下要求

  • 载体体积 ≥ 100 uL(质粒材料不得置于滤纸上提交)
  • 载体浓度 ≥ 100 ng/uL
  • 载体质量 10 ug
  • 必须有细菌复制起点(非低拷贝)
  • 必须为克隆群体
  • 必须为环形
  • 必须有抗生素耐药性标记
  • 在插入位点的 40 bp 范围内,不得含有大于 9 bp 的均聚物/重复序列
  • 重复:必须包含至少 40 bp 的独特序列,在插入位点的上游和下游无大于 19 bp 的直接或反向重复
  • 最终基因产品中不得含有 ccdB
  • 在插入位点 50 bp 的范围内,必须能够通过限制酶位点实现线性化
  • 必须符合 BSL-1

抗生素耐药性:

质粒必须包含以下大肠杆菌抗生素耐药性标记之一标准浓度如下:

抗生素  

生产中可用的标准浓度 (ug/mL)

Kan

50

AMP

100

CHLOR

25

APRA

50

SPEC

100

TET

10

ZEO

50

BLAST

100

细胞系(大肠杆菌)       

  • 生产中可用的细胞系        
  • 类似于 DH10Beta 的克隆株   
  • 类 Stbl3 菌株(可在 37°C 下生长)        

拷贝编号              

仅允许使用结构复制起点。

Twist 定义

已接受

示例

ColE1/pMB1/pBR322/pUC

是,小规模制备收率下降

p15A

pSC101

生长条件     

  • 标准温度:37°C/30°C   
  • 标准时间:过夜/24 小时         
  • 接种的菌落在 LB-Lennox 上生长 16 小时/24 小时后,必须达到自动化适用大小。

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