对定制载体有什么要求?
确保您的载体满足以下要求:
- 载体体积 ≥ 100 uL(质粒材料不得置于滤纸上提交)
- 载体浓度 ≥ 100 ng/uL
- 载体质量 10 ug
- 必须有细菌复制起点(非低拷贝)
- 必须为克隆群体
- 必须为环形
- 必须有抗生素耐药性标记
- 在插入位点的 40 bp 范围内,不得含有大于 9 bp 的均聚物/重复序列
- 重复:必须包含至少 40 bp 的独特序列,在插入位点的上游和下游无大于 19 bp 的直接或反向重复
- 最终基因产品中不得含有 ccdB
- 在插入位点 50 bp 的范围内,必须能够通过限制酶位点实现线性化
- 必须符合 BSL-1
抗生素耐药性:
质粒必须包含以下大肠杆菌抗生素耐药性标记之一标准浓度如下:
抗生素 |
生产中可用的标准浓度 (ug/mL) |
Kan |
50 |
AMP |
100 |
CHLOR |
25 |
APRA |
50 |
SPEC |
100 |
TET |
10 |
ZEO |
50 |
BLAST |
100 |
细胞系(大肠杆菌)
- 生产中可用的细胞系
- 类似于 DH10Beta 的克隆株
- 类 Stbl3 菌株(可在 37°C 下生长)
拷贝编号
仅允许使用结构复制起点。
Twist 定义 |
已接受 |
示例 |
高 |
是 |
ColE1/pMB1/pBR322/pUC |
中 |
是,小规模制备收率下降 |
p15A |
低 |
否 |
pSC101 |
生长条件
- 标准温度:37°C/30°C
- 标准时间:过夜/24 小时
- 接种的菌落在 LB-Lennox 上生长 16 小时/24 小时后,必须达到自动化适用大小。
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