为了保持野生型蛋白质表达：

• 我们会避免使用稀有密码子（密码子频率低于 8%）。
• 我们会确保所得序列的前 48 个碱基对中的序列没有牢固的发夹结构 (ΔG < -8)。
• 我们会对两条链都进行检查，确保它们没有包含您要求避免的酶切位点。
• 我们会通过避免产生 sigma70 强结合位点来防止将启动子序列引入表达序列的内部。
• 我们会避免那些产生核糖体强结合位点的序列（GGAGG 和 TAAGGAG）。
• 我们会避免那些产生终止子序列的序列（TTTTT 或 AAAAA）。

为了提高合成的成功率：

• 我们不会引入任何超过 20 bp 的重复序列。
• 我们避免存在 10 个或更多碱基的均聚物。
• 我们避免那些产生小于 25％ 或大于 65％ 的整体 GC％ 和小于 35％ 或大于 65％ 的局部 GC 窗口 (50 bp) 的拟合序列。

请注意，密码子优化有助于提高成功合成的概率，而非蛋白质表达。