カスタムベクターを作製するための要件を教えてください。

ベクターが以下の要件を満たしていることをご確認ください

  • ベクター容量:≧ 100 μL(プラスミドはろ紙に載せて提出することはできません)
  • ベクター濃度:≧ 100 ng/μL
  • ベクター総量:10 μg
  • 大腸菌の複製起点を有すること(低コピーではない)
  • クローン性集団であること
  • 環状(閉環)であること
  • 抗生物質耐性マーカーを有すること
  • 挿入部位から 40 bp の範囲内に 9 bp を超えるホモポリマー/反復配列を含まないこと
  • 反復配列:挿入部位から 19 bp 超以降の上流および下流では、最低 40 bp のユニーク配列を含むこと(直接または逆位反復配列を含まないこと)
  • 最終的な遺伝子産物には ccdB(致死性遺伝子)が含まれないこと
  • 挿入部位から 50 bp 以内の制限酵素部位で切断できること
  • BSL-1(バイオセーフティレベル1)対応であること

抗生物質耐性:

プラスミドには、以下の大腸菌の抗生物質耐性マーカーのいずれかが含まれている必要があります。標準的な濃度は以下の通りです。

抗生物質  

製造時の標準的濃度(μg/mL)

Kan

50

AMP

100

CHLOR

25

APRA

50

SPEC

100

TET

10

ZEO

50

BLAST

100

細胞株(大腸菌)   

  • Twist で利用可能な細胞株        
  • DH10Beta と同様のクローニング株   
  • Stbl3 と同様な(37 ℃で増殖可能な)株        

コピー数            

複製起点を構造に含むもののみ利用可能です。

Twist の定義

受付の可否

はい

ColE1/pMB1/pBR322/pUC

はい(ミニプレップ収量は減少)

p15A

いいえ

pSC101

増殖条件 

  • 標準的な温度:37 ℃/30 ℃   
  • 標準的な時間:一晩/24 時間         
  • LB-Lennox 上に播種、16 時間/24 時間増殖させた後、コロニーが自動化処理に適した大きさに到達している必要があります。

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