カスタムベクターを作製するための要件を教えてください。
ベクターが以下の要件を満たしていることをご確認ください。
- ベクター容量:≧ 100 μL(プラスミドはろ紙に載せて提出することはできません)
- ベクター濃度:≧ 100 ng/μL
- ベクター総量:10 μg
- 大腸菌の複製起点を有すること(低コピーではない)
- クローン性集団であること
- 環状(閉環)であること
- 抗生物質耐性マーカーを有すること
- 挿入部位から 40 bp の範囲内に 9 bp を超えるホモポリマー/反復配列を含まないこと
- 反復配列:挿入部位から 19 bp 超以降の上流および下流では、最低 40 bp のユニーク配列を含むこと(直接または逆位反復配列を含まないこと)
- 最終的な遺伝子産物には ccdB(致死性遺伝子)が含まれないこと
- 挿入部位から 50 bp 以内の制限酵素部位で切断できること
- BSL-1(バイオセーフティレベル1)対応であること
抗生物質耐性:
プラスミドには、以下の大腸菌の抗生物質耐性マーカーのいずれかが含まれている必要があります。標準的な濃度は以下の通りです。
抗生物質 |
製造時の標準的濃度(μg/mL) |
Kan |
50 |
AMP |
100 |
CHLOR |
25 |
APRA |
50 |
SPEC |
100 |
TET |
10 |
ZEO |
50 |
BLAST |
100 |
細胞株(大腸菌)
- Twist で利用可能な細胞株
- DH10Beta と同様のクローニング株
- Stbl3 と同様な(37 ℃で増殖可能な)株
コピー数
複製起点を構造に含むもののみ利用可能です。
Twist の定義 |
受付の可否 |
例 |
高 |
はい |
ColE1/pMB1/pBR322/pUC |
中 |
はい(ミニプレップ収量は減少) |
p15A |
低 |
いいえ |
pSC101 |
増殖条件
- 標準的な温度:37 ℃/30 ℃
- 標準的な時間:一晩/24 時間
- LB-Lennox 上に播種、16 時間/24 時間増殖させた後、コロニーが自動化処理に適した大きさに到達している必要があります。
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