NGS メチル化検出システム

Twist Bioscience は、New England Biolabs (NEB) との提携により、ライブラリの品質を改善し、調製時にダメージを与えるバイサルファイト処理を不要にする新しいメチル化シーケンスのワークフローをご提供します。 

 

このワークフローは、非メチル化シトシンを酵素で変換し（図を参照）、5-メチルシトシン（5mC）および 5-ヒドロキシメチルシトシン（5hmC）の部位を同定することを特徴としています。 

 

酵素による変換によって、より良好な状態でより完全なライブラリが作製され、結果として、より高感度のメチル化検出が可能です。このライブラリ調製システムは、全ゲノムシーケンス解析や、 Twist メチル化パネルを用いた下流工程でのエンリッチメントに適しています。 

EM-seq 変換は、非メチル化シトシンをウラシルに変換する一連の酵素反応を伴います。最終的な結果は従来のバイサルファイト変換と同じであるため、EM-seq は Bismark や bwa-meth を用いる既存の解析パイプラインとの互換性があります。 

Twist Fast ハイブリダイゼーション・洗浄キットは、最大限の柔軟性で最適なパフォーマンスを実現します。試薬やステップを最適化することで、下流のシーケンシング指標を調整し、手を動かす時間やピペットの使用を減らすことができます。 

Twist カスタムメチル化パネルは、高度に洗練されたアルゴリズムで設計されており、幅広いターゲットサイズに対して並外れた効率でターゲットをキャプチャします。これらの要素を組み合わせることで、目的のカスタム領域に対する業界トップクラスのハイブリッドキャプチャを実現します。

ターゲットメチル化シーケンスワークフローでは、オフターゲットキャプチャが頻繁に起こります。これは、変換プロセスにより、ライブラリ調製時のサンプルの配列の複雑性が減少するためです。 

変換後のサンプルのキャプチャを最大化するため、 Twist メチル化検出システムは、メチル化検出専用に設計された独自のブロッカーを備えています。この試薬はメチル化エンハンサーと呼ばれ、オフターゲットキャプチャを最大で半減させることができます。  
 

メチル化レベルはヒトゲノムの場所によって大きな差があり、そうしたメチル化差異領域（differentially methylated regions; DMR）は特定のがんの同定に利用することができます。 

メチル化レベルが Twist メチル化検出システムのパフォーマンスに及ぼす影響を調べるため、低メチル化および高メチル化ゲノム DNA を所定の割合で組み合わせることにより、さまざまなメチル化レベル（メチル化率：0 ～ 100%）のライブラリを作製しました。この解析により、メチル化レベルが最終的なシーケンシング指標に及ぼす影響は極めて少ないことが示されました。

Twist メチル化検出システムは、低メチル化領域も高メチル化領域も、高感度でキャプチャします。