Was sind die Anforderungen für meinen kundenspezifischen Vektor?
Stellen Sie sicher, dass Ihr Vektor die folgenden Anforderungen erfüllt:
- Vektorvolumen ≥ 100 ul (Plasmidmaterial kann nicht auf Filterpapier eingereicht werden)
- Vektorkonzentration ≥ 100 ng/ul
- Vektormasse 10 ug
- muss bakteriellen Replikationsursprung haben (keine niedrige Kopie)
- muss klonale Zellpopulation sein
- muss zirkulär sein
- muss Antibiotikaresistenzmarker aufweisen
- darf keine Homopolymere/repetitive Sequenz von > 9 bp innerhalb von 40 bp von der Insertionsstelle enthalten
- Wiederholungen: muss mindestens 40 bp einer eindeutigen Sequenz ohne direkte oder invertierte Wiederholungen von > 19 bp, der Insertionsstelle vor- und nachgelagert, enthalten
- darf kein ccdB im endgültigen Genprodukt enthalten
- muss in der Lage sein, innerhalb von 50 bp von der Insertionsstelle nach Restriktionsenzymstelle zu linearisieren
- muss BSL-1-konform sein
Antibiotikaresistenz:
Plasmid muss einen der folgenden Antibiotikaresistenzmarker für E. coli enthalten. Standardkonzentrationen sind aufgeführt:
Antibiotikum |
In der Produktion verfügbare Standardkonzentration (ug/ml) |
Kan |
50 |
AMP |
100 |
CHLOR |
25 |
APRA |
50 |
SPEC |
100 |
TET |
10 |
ZEO |
50 |
BLAST |
100 |
Zelllinien (E. coli)
- in der Produktion verfügbare Zelllinie
- Klonierungsstamm ähnlich DH10Beta
- Stbl3-ähnlicher Stamm (kann bei 37 ℃ gezüchtet werden)
Kopienummer
Es sind nur konstitutive Replikationsursprünge zulässig.
Twist Definition |
Akzeptiert |
Beispiel |
Hoch |
Ja |
ColE1/pMB1/pBR322/pUC |
Mittel |
Ja, reduzierte Miniprep-Ausbeute |
p15A |
Niedrig |
Nein |
pSC101 |
Wachstumsbedingungen
- Standardtemperatur: 37 ℃/30 ℃
- Standardzeit: Über Nacht/24 Std.
- Beschichtete Kolonien müssen nach 16 Stunden/24 Stunden Wachstum auf LB-Lennox eine automatisierungsfreundliche Größe erreichen.
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