Das Twist FlexPrep^TM UHT Libraryvorbereitungs-Kit verfolgt einen neuartigen Ansatz der Normalization by Ligation^TM, der den Bedarf an
Vorab- und Zwischenquantifizierung von Proben eliminiert, wodurch Ihr Sequenzierungs-Workflow rationalisiert wird.

Fragmentierungs- und Ligationsreaktionen werden in einem Well pro Probe vorbereitet. Die Adapter, die bei der Ligation verwendet werden, enthalten Inline-Barcodes, die das Pooling aller 12 Wells in einer Reihe einer 96-Well-Platte ermöglichen. Einzelne Pools werden mit Indizes (UDIs) vorbereitet, die durch PCR für das Demultiplexing auf Pool-Ebene hinzugefügt werden. Der Sequenzierdurchsatz kann maximiert werden, indem bis zu 1.152 Proben in einem einzigen Sequenzierlauf mit einem FlexPrep Kit verarbeitet werden. Diese erhöhte Effizienz kann zu Einsparungen bei Kosten und Verbrauchsmaterialien führen.

Normalisierung der NGS-Lesetiefe mit variablem DNA-Massen-Input. Der Prozentsatz der Gesamtanzahl der Lesungen, die jeder Library zugeordnet werden können, wird nach dem eindeutigen dualen Index und dem Inline-Barcode-Demultiplexing berechnet. Der Durchschnitt mit perfekter Normalisierung wird auf 1,04 % (100/96) geschätzt.

FlexPrep UHT erzeugt hochkomplexe Librarys, die nach der Anreicherung der Targets eine einheitliche Abdeckung aufweisen. In Kombination mit den benutzerdefinierten Panels von Twist bietet FlexPrep eine abstimmbare Abdeckung von SNPs, k-mers, Strukturvarianten und anderen genomischen Bereichen von Interesse. Das angereicherte Material wurde auf eine durchschnittliche 75-fache Abdeckung heruntergerechnet. Die wichtigsten Metriken zum Target Enrichment aus Picard werden berichtet.