Non, tous les fragments du pool doivent avoir les mêmes régions flanquantes. Il est possible de commander plusieurs ensembles de régions flanquantes en commandant plusieurs pools. Il est également possible de concevoir un pool unique avec des régions flanquantes internes différentes et des régions flanquantes externes universelles que Twist utilisera pour l’amplification. Il est ensuite possible d’amplifier les sous-pools, bien que cela comporte le risque inhérent de biaiser l’uniformité et/ou d’épuiser le matériel de référence.