Le démultiplexage des banques Twist 96-Plex diffère du processus standard. Les codes-barres des échantillons individuels sont alignés en tant que partie de R1, au lieu de l’emplacement standard i5. Pour cette raison, les outils bcl2fastq2 et BCLconvert d’Illumina ne reconnaissent pas le code-barres de l’échantillon individuel et combinent plutôt tous les puits ensemble dans un seul fichier FASTQ au niveau de la plaque pendant le démultiplexage, basé sur l’indice i7 unique. 

Pour remédier à cela, les utilisateurs de 96-Plex doivent suivre un processus de démux en deux étapes. Tout d’abord, les fichiers BCL par cycle doivent être convertis en FASTQ au niveau de la plaque, puis suivis d’une seconde conversion des fichiers FASTQ au niveau de la plaque en fichiers FASTQ spécifiques aux échantillons. Nous recommandons d’utiliser le logiciel open source fgbio DemuxFastqs pour produire des FASTQ par échantillon. Consultez le guide de démultiplexage sur le site Web de Twist pour plus d’informations.