Kit de fragmentación enzimática

Fragmentación enzimática mejorada

El kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática (EF) Twist 2.0 está diseñado para ayudarle a conseguir una secuenciación más eficiente y unos resultados de la secuenciación de última generación (NGS) más precisos. En comparación con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 1.0, este kit actualizado presenta varias ventajas. Además de los nuevos módulos de fragmentación y unión, el kit actualizado ahora incluye la mezcla de amplificación de preparación de bibliotecas Equinox. Esta formulación enzimática de arranque en caliente presenta una menor tasa de error* y una mayor eficiencia a volúmenes de entrada bajos, lo que le hace ideal para muestras como las de tejidos fijados en formol e incluidos en parafina, en las que se necesitan una eficiencia y un rendimiento altos.

El flujo de trabajo optimizado del kit combina los pasos de preparación de bibliotecas en una reacción en un solo tubo que, junto con una tasa de quimeras baja y el flujo de trabajo de enriquecimiento del objetivo altamente uniforme de Twist, permite una preparación de bibliotecas y un resultado de secuenciación de mejor calidad.

* Con respecto a la fragmentación enzimática Twist 1.0

Flujo de trabajo de preparación de bibliotecas

El kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 incluye los reactivos necesarios para la reparación de extremos, la adición de AMP-d al extremo 3’, la unión del adaptador y la amplificación de la biblioteca. Este kit también incorpora las enzimas para la fragmentación de muestras de ADNg y permite tamaños de inserción ajustables. Después de la construcción de la biblioteca principal, se pueden utilizar adaptadores universales o de longitud completa para satisfacer las necesidades de su aplicación.

Flujo-trabajo-kits-adaptadores-universales-y-reactivos-NGS-Twist

BENEFICIOS CLAVE

Optimice su flujo de trabajo

Entrada de muestras de ADN flexible de 1 ng‑500 ng

Convierta las muestras de ADN en bibliotecas sólidas y amplificadas en tres horas

Preparación de bibliotecas en un solo tubo para una mejor eficiencia y resultados coherentes

Amplificación sólida y de alto rendimiento

Formulación enzimática de arranque en caliente con una alta eficiencia a volúmenes de entrada bajos

Gran intervalo de tolerancia de contenido de GC (20-80 %) durante la preparación de bibliotecas

Tasa de error mejorada en comparación con una polimerasa de uso frecuente

Alta uniformidad y menor tasa de quimeras

Se combina con el flujo de trabajo de enriquecimiento del objetivo de Twist para permitir una amplificación muy uniforme

Mayor confianza en la detección de auténticas quimeras

El rendimiento coherente de las bibliotecas muy complejas ofrece tanto sensibilidad como especificidad

Nuevo ID de muestras humanas

Garantice la precisión de la secuenciación de exomas completos mediante el seguimiento de las muestras desde la sangre completa. El ID de muestras humanas Twist utiliza la preparación de bibliotecas Twist y el PCR multiplexado establecidos para identificar y realizar un seguimiento de las muestras con el fin de evitar la mezcla de las muestras y datos incorrectos.

Más información

Explorar más

Obtener unos buenos datos de secuenciación de última generación (NGS) de incluso las muestras más complejas requiere los mejores reactivos durante toda la secuenciación.

Lea nuestro blog para descubrir cómo el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 está formulado para garantizar una calidad excepcional de las bibliotecas y así obtener unos datos de NGS excepcionales.

Kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0

¿Necesita fragmentación mecánica?

Cuando se trabaja con muestras degradadas difíciles, como las de tejidos fijados en formol e incluidos en parafina, la fragmentación mecánica puede ser una opción viable. Y, al igual que la fragmentación enzimática, los reactivos de calidad son clave para obtener unos resultados de calidad. Obtenga más información sobre nuestro kit de preparación de bibliotecas de fragmentación mecánica.

Permanezca en el objetivo

La tasa en el objetivo del kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 es equivalente a la tasa en el objetivo alcanzada con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 1.0. Aquí se muestra una comparación de la fracción de activaciones en el objetivo en distintas condiciones de hibridación.

El enriquecimiento del objetivo se realizó con el panel de exoma nuclear Twist y el sistema de adaptador universal Twist. La secuenciación se realizó en plataformas NextSeq® 550 o 2000. Se submuestrearon los datos a 150x el tamaño del objetivo y se analizaron mediante las métricas de Picard. Las barras de error representan la desviación estándar entre réplicas.

Reduzca las tasas de quimeras para reducir los errores de secuenciación

Durante la preparación de bibliotecas, la minimización de uniones o recombinaciones inadecuadas de ADN minimiza los errores de secuenciación derivados de quimeras. El kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 proporciona una fracción significativamente reducida de lecturas de quimeras, como se muestra aquí en comparación con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 1.0. También muestra tasas de quimeras equivalentes a la preparación de bibliotecas con fragmentación mecánica.

Las bibliotecas de NGS se generaron con el kit de preparación de bibliotecas con fragmentación enzimática Twist 1.0, el kit de preparación de bibliotecas con fragmentación enzimática Twist 2.0 o el kit de preparación de bibliotecas Twist con fragmentación mecánica. El enriquecimiento del objetivo se realizó con el panel de exoma nuclear Twist y el sistema de adaptador universal Twist. La secuenciación se realizó en una plataforma NextSeq® 2000. Se submuestrearon los datos a 150x el tamaño del objetivo y se comunicó la métrica Picard PCT_CHIMERAS. Las barras de error representan la desviación estándar entre réplicas.

Rendimiento coherente de ciclo a ciclo

El rendimiento repetible garantiza la confianza en los resultados. Cuando las condiciones del experimento se mantienen constantes, el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 proporciona un tamaño de fragmento de biblioteca de ADN sólido y coherente. Aquí se muestran 8 electroferogramas diferentes de bibliotecas de secuenciación de última generación (NGS) generadas con el kit. La superposición de las curvas fluorescente demuestra la coherencia en la preparación de bibliotecas que puede alcanzarse de un ciclo a otro.

Las bibliotecas de NGS se generaron con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 y el sistema de adaptador universal Twist. Se fragmentaron 50 ng de ADNg de alta calidad durante 20 minutos a 37 °C. Se utilizaron 6 ciclos de PCR para la amplificación. Las muestras se analizaron con el análisis Agilent DNA 7500 y los resultados se superpusieron en el software Expert 2100.

Ajuste el tamaño de los fragmentos para que se ajusten a las necesidades de sus experimentos

Con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0, el tamaño de los fragmentos de la biblioteca de ADN puede adaptarse a sus necesidades específicas con tan solo ajustar el tiempo de fragmentación. Aquí se muestran los cuatro electroferogramas de las bibliotecas de NGS generadas con distintos tiempos de fragmentación.

Las bibliotecas de NGS se generaron con el kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 y el sistema de adaptador universal Twist. Se fragmentaron 50 ng de ADNg de alta calidad durante distintos tiempos a 37 °C. Se utilizaron 6 ciclos de PCR para la amplificación. Las muestras se analizaron con el análisis Agilent DNA 7500 y los resultados se superpusieron en el software Expert 2100.

Amplificación mejorada de la biblioteca para minimizar los errores de secuenciación

Los errores durante la amplificación son inevitables, pero no tienen que ser comunes. El kit de preparación de bibliotecas de fragmentación enzimática Twist 2.0 incluye la mezcla maestra Equinox, que incluye una enzima de arranque caliente de alta fidelidad. En comparación con la polimerasa previamente recomendada y de uso común, la mezcla maestra Equinox demuestra una tasa de error menor con menos bases mal incorporadas. Esto supone una amplificación más precisa y, en última instancia, datos de secuenciación fiables.

Los casos de bases mal incorporadas en numerosas parejas de bases mal emparejadas se midieron con un análisis patentado basado en la NGS. Los valores presentados representan una tasa de error media de todos los casos de incorporaciones incorrectas.