El kit de preparación de bibliotecas FlexPrep^TM UHT Twist adopta un nuevo enfoque de Normalization by Ligation^TM que elimina la necesidad de
la normalización previa y la cuantificación intermedia, lo que optimiza el flujo de trabajo de secuenciación.

Las reacciones de fragmentación y ligadura se preparan en un pocillo por muestra. Los adaptadores usados durante la ligadura contienen códigos de barra en línea que permiten la agrupación de los 12 pocillos consecutivos en una placa de 96 pocillos. Las agrupaciones individuales se preparan con índices (UDI) añadidos por PCR para la desmultiplexación de la agrupación. El rendimiento de la secuenciación se puede maximizar gestionando hasta 1.152 muestras en un solo ciclo de secuenciación de un kit FlexPrep. Esta eficiencia incrementada se puede traducir en ahorros en costes y consumibles.

Normalización de la profundidad de lectura de NGS con entrada de masa de ADN variable. El porcentaje de los recuentos totales de lecturas identificado de cada biblioteca se calcula tras un índice doble único y la desmultiplexación de los códigos de barras en línea. La media con la normalización perfecta se calcula en un 1,04 % (100/96).

FlexPrep UHT genera bibliotecas de alta complejidad con una cobertura uniforme tras el enriquecimiento del objetivo. En combinación con los paneles personalizados Twist, FlexPrep ofrece una cobertura ajustable de SNP, k-meros, variantes estructurales y otras áreas genómicas de interés. Los materiales enriquecidos se submuestrearon a una cobertura media 75x. Se comunican métricas clave de enriquecimiento del objetivo de Picard.