¿Cuáles son los requisitos para mi vector personalizado?
Asegúrese de que su vector cumpla con los requisitos siguientes:
- Volumen vectorial ≥ 100 ul (el material plasmídico no se puede enviar en papel de filtro)
- Concentración de vector ≥ 100 ng/ul
- Masa del vector 10 ug
- Debe tener un origen de replicación bacteriano (no en un número de copias bajo)
- Debe ser población clonal
- Debe ser circular
- Debe tener un marcador de resistencia a antibióticos
- No debe contener homopolímeros/secuencia repetitiva > 9 pb dentro de los 40 pb del sitio de inserción
- Repeticiones: debe contener al menos 40 pb de secuencia única sin repeticiones directas o invertidas > 19 pb antes y después del sitio de inserción
- No debe contener ccdB en el producto genético final
- Debe poder linealizar por el sitio de la enzima de restricción dentro de los 50 pb del sitio de inserción
- Debe ser compatible con BSL-1
Resistencia a antibióticos:
El plásmido debe contener uno de los siguientes marcadores de resistencia a antibióticos para la E. coli. Las concentraciones estándar están a continuación:
Antibiótico |
Concentración estándar disponible en producción (ug/ml) |
Kan |
50 |
AMP |
100 |
CHLOR |
25 |
APRA |
50 |
SPEC |
100 |
TET |
10 |
ZEO |
50 |
BLAST |
100 |
Líneas celulares (E. coli)
- Línea celular disponible en producción
- Cepa de clonación similar a DH10Beta
- Cepa similar a Stbl3 (se puede cultivar a 37 ℃)
Número de copias
Solo se permiten los orígenes de replicación constitutivos.
Definición de Twist |
Aceptado |
Ejemplo |
Alto |
Sí |
ColE1/pMB1/pBR322/pUC |
Medio |
Sí, rendimiento de minipreparación reducido |
p15A |
Bajo |
No |
pSC101 |
Condiciones de crecimiento
- Temperatura estándar: 37 ℃/30 ℃
- Tiempo estándar: Noche/24 horas
- Las colonias en placa deben alcanzar un tamaño compatible con la automatización después de 16 horas/24 horas de crecimiento en LB-Lennox.
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